Головна Головна -> Реферати українською -> Дисертації та автореферати -> Скачати реферат: Індукція каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c

Індукція каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c / сторінка 4

Назва:
Індукція каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c
Тип:
Реферат
Мова:
Українська
Розмiр:
21,83 KB
Завантажень:
151
Оцінка:
 
поточна оцінка 5.0

Скачати цю роботу безкоштовно
Пролистати роботу: 1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14 
Матеріали дисертаційної роботи було продемонстровано на VII Українському біохімічному з’їзді (м. Київ, 1997р.); міжнародних конференціях – “XVth International Congress on Fibrinolysis & Proteolysis (Японія, Хамамацу, 2000р.); XVIII International Symposium Thrombosis and Haemostasis (Франція, Париж, 2001р.). Матеріали роботи було представлено на конкурсі молодих вчених (Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України, м. Київ, 1999р.), доповідались на засіданнях відділу структури та функції білка та на науковому семінарі Інституту біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України.
Публікації. За матеріалами дисертаційної роботи опубліковано 3 статті в періодичних наукових спеціальних виданнях України, включених до переліку, затвердженому ВАК України та 3 тези доповідей у збірках наукових конференцій.
Структура та обсяг дисертації. Дисертаційна робота складається з вступу, огляду літератури (1 розділ, 5 підрозділів), експериментальної частини (3 розділи, 5 підрозділів), висновків та списку літературних джерел (210 найменувань). Роботу викладено на 132 сторінках, вона містить 34 рисунки, 3 схеми та 1 таблицю.
ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ
ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ
В огляді літератури представлено сучасні дані щодо структури та властивостей молекули плазміногену, детально представлено інформацію щодо процесу активації проферменту. Представлено дані щодо компонентів системи фібринолізу, які виконують роль активаторів плазміногену за фізіологічних умов і некаталітичних індукторів каталітичної активності екзогенного походження.
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
У роботі було використано такі матеріали та реактиви: трис(гідроксиметил)амінометан, хромогенний субстрат плазміну S-2251 (H-D-Вал-Лей-Ліз-pNa), a-казеїн, диізопропілфторфосфат (DFP, ДФФ) (“Merck”, Німеччина), п-нітрофеніловий ефір гуанідинбензойної кислоти (p-NFGB) (“Sigma”, США); стрептокіназа Kabikinase (“Pharmacia AG”, Швеція), Cibacron Blue-Sepharose, Sepharose CL 4B, Sephacryl S-200, Superose 12 HR, протеїн А-Sepharose (“Pharmacia”, Швеція; “Amersham Pharmacia Biotech”, США), альбумін сироватки крові бика (“Calbiоchem”, США). Неорганічні сполуки ступеню чистоти 'хч' або вищої. Планшети для ІФА (“Costar”, США; “Nunc”, Nalge Nunc International, США).
Одержання плазміногену. Глу-плазміноген одержували з донорської плазми на лізин – сефарозі. Ліз-форму плазміногену – з фракції ІІІ2,3 за Коном також на лізин – сефарозі. Проводили гель-фільтрацію на Sephacryl S-200. Препарати плазміногенів зберігали при –20oС. Одержані препарати плазміногену мали потенційну протеолітичну активність 18-22 казеїнолітичні одиниці на 1 мг білка. Спонтанну активність у препараті плазміногену не виявляли за інкубації протягом 6 годин з хромогенним субстратом S-2251. Чистоту одержаних препаратів контролювали електрофоретично в 10% ПААГ з ДС-Na, та в 11,5 % ПААГ з оцтовою кислотою і сечовиною за рН 3.2.
Одержання препаратів плазміну. Плазмін одержували з препаратів Глу-плазміногену за стандартною методикою з використанням імобілізованої на BrCN-сефарозі-4В урокінази. Плазміноген інкубували з імобілізованою урокіназою протягом 1 години при температурі 370С у 0,05 М трис-НCl буфері, рН 7.4, з вмістом 0,15 М NaCl і 25% гліцерину.
Вимірювання амідолітичної активності плазміну. Активність плазміну визначали за вивільненням паранітроаніліну з хромогенного субстрату S-2251 (H-D-Вал-Лей-Ліз-pNa) – 3 мМ, яке реєстрували в двохвильовому режимі за 405 та 492 нм на ридері-спектрофотометрі для мікропланшетів Titertek Multiskan МС (Фінляндія). Реакцію проводили в планшетах для імуноферментного аналізу в 0,05 М трис-НСІ буфері рН 7,4. який містив 0,15 М NaCI, при 37oС, концентрація плазміногену становила – 100 нМ (25 пмоль), стрептокінази – 10 IU/мл і S-2251- 0,3 мМ. Кінцевий об'єм проби – 250 мкл.
Вплив a2-антиплазміну на реакцію індукції каталітичної активності Глу–плазміногену моноклональним антитілом IV-Ic. У реакційне середовище вносили послідовно: Глу-плазміноген до кінцевої концентрації 100 нМ, a2-антиплазмін до кінцевої концентрації 30 нМ (7,5 пмоль), антиплазміногенове моноклональне антитіло IV-1c - 100 нМ (25 пмоль), 100 мМ фосфатний буфер рН 7.

Завантажити цю роботу безкоштовно

Пролистати роботу: 1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14 
Реферат на тему: Індукція каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c

BR.com.ua © 1999-2019 | Реклама на сайті | Умови використання | Зворотній зв'язок