Головна Головна -> Реферати українською -> Дисертації та автореферати -> Скачати реферат на тему: Теоретичне обгрунтовування та експерИментальна перевірка ефективності швидкого двоступінчастого заморожування

Теоретичне обгрунтовування та експерИментальна перевірка ефективності швидкого двоступінчастого заморожування / сторінка 10

Назва:
Теоретичне обгрунтовування та експерИментальна перевірка ефективності швидкого двоступінчастого заморожування
Тип:
Реферат
Мова:
Українська
Розмiр:
18,21 KB
Завантажень:
360
Оцінка:
 
поточна оцінка 5.0

Скачати цю роботу безкоштовно
Пролистати роботу: 1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11 

Ключові слова: клітини кісткового мозку, чисельне моделювання, швидке двоступінчасте заморожування, переохолодження, внутрішньоклітинна кристалізація, диметилсульфоксид, постгіпертонічний кріолізис, фагоцитарна активність, колонієутворення.
Останков М.В. Теоретическое обоснование и экспериментальная проверка эффективности быстрого двухступенчатого замораживания. – Рукопись.
Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.19 – криобиология и криомедицина. – Институт проблем криобиологии и криомедицины Национальной Академии наук Украины, Харьков, 2001.
В работе проведены теоретические расчеты и сопоставлены зависимости переохлаждения внутриклеточного раствора, объема клеток и концентрации, растворенных внутри них веществ от температуры при охлаждении клеток костного мозга мыши с постоянной скоростью 1оС/мин и 10оС/мин и при быстром двухступенчатом замораживании. Справедливость этих общих теоретических представлений подтверждена путем сопоставления с конкретными экспериментальными данными по криоконсервированию клеток костного мозга мыши. Показано, что экспоненциальное, в частности двухступенчатое, охлаждение, обеспечивало более высокую устойчивость консервируемых клеток к постгипертоническому лизису. Кроме того в случае быстрого двухступенчатого охлаждения путем подбора субнулевой температуры изотермической экспозиции можно снизить вероятность внутриклеточной кристаллизации, несмотря на то, что скорость охлаждения на начальном и конечном участках значительно превышает оптимальные с точки зрения двухфакторной теории криоповреждения значения. При быстром двухступенчатом замораживании клетки костного мозга мыши экспонировались в окружающем их растворе с повышенной концентрацией криопротектора в области околонулевой температуры значительно меньший промежуток времени, чем при линейном режиме. Количество ДМСО в деконсервированных клетках после быстрого двухступенчатого замораживания меньше, чем после линейного режима охлаждения, что обуславливало повышенную устойчивость клеток костного мозга к гипертоническому лизису. Кроме того, по данным криомикроскопии образование внутриклеточных кристаллов при быстром двухступенчатом замораживании, хотя и имело место в отдельных клетках, но не приводило к их гибели, так как к моменту “температурной остановки” количество внутриклеточного льда было недостаточным для разрушения. В процессе экспозиции при субнулевой температуре за счет эффекта рекристаллизации количество внутриклеточного льда уменьшалось, кристаллы, вероятно, плавились и, за счет выхода части воды из клеток, и превращались во внеклеточный лед. Таким образом, быстрое двухступенчатое замораживание, сохраняя все достоинства оптимального линейного режима охлаждения, имеет перед ним существенные преимущества. Методом криомикроскопии было показано, что выравнивание вне- и внутриклеточных концентраций диметилсульфоксида осуществлялось в пределах минуты и при оптимальном режиме быстрого двухступенчатого замораживания клетки костного мозга сохраняли свою структуру.
Расчетным путем определены оптимальные с точки зрения предотвращения внутриклеточной кристаллизации параметры охлаждения клеток костного мозга при быстром двухступенчатом замораживании и при постоянной скорости 1оС/мин и 10оС/мин под защитой 1М и 1,5М диметилсульфоксида.
Построена биофизическая количественная модель процесса отмывания клеток от криопротектора и на ее основе определены подходящие условия однократной отмывки оттаянных клеток костного мозга от диметил-сульфоксида. При использовании в качестве отмывающего вещества водного раствора хлорида натрия (NaCl) с молярностью 1,5М полученны результаты, которые оказались выше, чем при использовании отмывающего раствора с меньшей концентрацией – 0,75М.
Экспериментально в опытах in vitro и in vivo подтверждены вытекающие из теоретического анализа прогнозы относительно оптимальных режимов замораживания клеток костного мозга и их отмывания от диметилсульфоксида.

Завантажити цю роботу безкоштовно

Пролистати роботу: 1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11 
Реферат на тему: Теоретичне обгрунтовування та експерИментальна перевірка ефективності швидкого двоступінчастого заморожування

BR.com.ua © 1999-2019 | Реклама на сайті | Умови використання | Зворотній зв'язок