Головна Головна -> Реферати українською -> Дисертації та автореферати -> Скачати реферат: Теоретичне обгрунтовування та експерИментальна перевірка ефективності швидкого двоступінчастого заморожування

Теоретичне обгрунтовування та експерИментальна перевірка ефективності швидкого двоступінчастого заморожування / сторінка 4

Назва:
Теоретичне обгрунтовування та експерИментальна перевірка ефективності швидкого двоступінчастого заморожування
Тип:
Реферат
Мова:
Українська
Розмiр:
18,21 KB
Завантажень:
360
Оцінка:
 
поточна оцінка 5.0

Скачати цю роботу безкоштовно
Пролистати роботу: 1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11 

Заморожування клітин кісткового мозку з постійною швидкістю охолодження 1С/хв і 10С/хв здійснювався на програмному заморожувачі УОП-06 виробництва СКТБ з ДВ ІПКіК НАН України. Швидке двоступінчасте заморожування проводилося за допомогою спеціального кріостата виробництва СКТБ з ДВ ІПКіК НАН України. Відігрівання здійснювали на водяній бані при 410С.
Для дослідження внутрішньоклітинного кристалоутворення використовували метод кріомікроскопії [Розанов Л.Ф., 1977]. Дослідження кінетики процесів дегідратації-регідратації клітин кісткового мозку при контакті з кріозахисними середовищами проводилося на експериментальній установці, розробленій в ІПКіК НАН України, що включає інтерференційно-поляризований мікроскоп МПІ-5 з кінокамерою й оптичною приставкою до мікроскопа.
Кількість клітин кісткового мозку підраховували в камері Горяєва. Ступінь збереження клітин кісткового мозку вивчали методом суправітального забарвлення трипановим синім у світловому мікроскопі і акридиновим жовтогарячим у люмінесцентному мікроскопі в полі зору при підрахуванні 500 клітин, виражаючи їх у відсотках стосовно вихідних показників [Кост Е.А., 1968]. Мієлограми готували із суспензії клітин, фіксуючи метанолом і офарблюючи азур-II еозіном за Романовським. Підрахунок якісного складу клітин кісткового мозку миші здійснювали у світловому мікроскопі PZO (об. х 90 – імерсія; ок. х 10) по полях зору на 500 клітин, виражаючи у відсотках до вихідних показників [Меркулов Г.А., 1961]. Функціональну повноцінність (в системі in vitro та in vivo) клітин кісткового мозку миші визначали за допомогою тесту фагоцитарної активності, що дозволяє визначити здібність гранулоцитів кісткового мозку поглинати загиблу культуру стафілокока [Александров М.Г., 1988]. Стан стовбурових клітин, їх колонієутворюючу активність оцінювали за допомогою методу селезінкового колонієутворення в опромінених летальною дозою мишей (СВАхC57Вl)F1 [Till, McCulloch, 1961].
Статистичну обробку одержаних результатів проводили за методом Стьюдента – Фішера [Ашмарин И.П., Воробьев А.А., 1962] на IBM PC Pentium-II з використанням пакета програм Microsoft Excel.
Результати власних досліджень автора. Результати розрахунку величини ефективного переохолодження цитоплазми клітин кісткового мозку при заморожуванні з постійною швидкістю і при швидкому двоступінчастому заморожуванні представлені на рис. 1 і 2.
Рис.1 Залежність ефективного переохолодження цитоплазми клітин кісткового мозку від зведеної температури при заморожуванні з постійною швидкістю: 1)Т0/(Т0)=10; 2)Т0/(Т0)=15; 3)Т0/(Т0)=25; де Т0 – початкова температура; т – швидкість охолодж.; 0=(Loin)-1; – поверхнево-об'ємне відношення клітин; L– коефіцієнт фільтрації клітинної мембрани; oin – осмотичний тиск фізіологічного розчину
Очевидно, при швидкому двоступінчастому заморожуванні ефективне переохолодження клітин після занурення зразка в рідину , охолоджену до -30С, у всіх розглянутих випадках лише на невеликий проміжок часу сягає значення близько 5С, а потім падає до нуля.
Рис.2 Залежність ефективного переохолодження цитоплазми клітин кісткового мозку миші від зведеної температури на першій стадії швидкого двоступінчастого заморожування: 1)/0=1; 2)/0=2; 3)/0=10; 4)/0=100
Таким чином, швидке двоступінчасте заморожування є більш оптимальним з огляду запобігання внутрішньоклітинній кристалізації, ніж охолодження з постійною швидкістю 1С/хв. Оптимальним часом витримування зразка в рідинному кріостаті можна вважати 15 хвилин, оскільки переохолодження внутрішньоклітинного розчину падає до нуля протягом часу, що не перевищує 12 хвилин. Оскільки при швидкому двоступінчастому охолодженні час заморожування порівняно з характерним часом проникнення води через клітинні мембрани є значно меншим, ніж час проникнення кріопротектора в клітини, після відтавання клітини є стійкішими до постгіпертонічного лізису, ніж заморожені зі швидкістю 1С/хв.
У такий спосіб розрахунковим шляхом установлено, що оптимальним режимом заморожування, з огляду запобігання клітин ушкодженню внутрішньоклітинними кристалами, є занурення клітинної суспензії в рідинний кріостат з температурою –30С на 15 хвилин із наступним переміщенням контейнера безпосередньо у рідкий азот.

Завантажити цю роботу безкоштовно

Пролистати роботу: 1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11 
Реферат на тему: Теоретичне обгрунтовування та експерИментальна перевірка ефективності швидкого двоступінчастого заморожування

BR.com.ua © 1999-2019 | Реклама на сайті | Умови використання | Зворотній зв'язок