Головна Головна -> Реферати українською -> Дисертації та автореферати -> реферат українською: МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧНА ДИФЕРЕНЦІАЦІЯ МІКОБАКТЕРІЙ, ВИДІЛЕНИХ В УКРАЇНІ, ТА ЇХ ФІЛОГЕНЕТИЧНІ ВЗАЄМОЗВ’ЯЗКИ

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧНА ДИФЕРЕНЦІАЦІЯ МІКОБАКТЕРІЙ, ВИДІЛЕНИХ В УКРАЇНІ, ТА ЇХ ФІЛОГЕНЕТИЧНІ ВЗАЄМОЗВ’ЯЗКИ / сторінка 5

Назва:
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧНА ДИФЕРЕНЦІАЦІЯ МІКОБАКТЕРІЙ, ВИДІЛЕНИХ В УКРАЇНІ, ТА ЇХ ФІЛОГЕНЕТИЧНІ ВЗАЄМОЗВ’ЯЗКИ
Тип:
Реферат
Мова:
Українська
Розмiр:
20,59 KB
Завантажень:
279
Оцінка:
 
поточна оцінка 5.0


Скачати цю роботу безкоштовно
Пролистати роботу: 1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13 
Деякі культури росли нерозрізненними дрібними колоніями у вигляді напилювання, формуючи суцільний газон сухуватого або слизького нальоту. 81 культура росла у S-формі, а 42 культури – у R-формі, дві культури росли як у R-, так і у S-формах. Найшвидші темпи росту фіксували в бульйоні 7Н9 Meaddlebrook. Первинний ріст M. bovis спостерігали на 16–36 добу, M. caprae – на 15–29 добу, M. – на 7–29 добу, M. doricum – на 42 добу, M.е – на 4 добу, M. engbackii – на 9 добу, M. parascrofulaceum – на 7 добу, M. confluentis – на 6 добу, M. hassiacum та M. elephantis – на 5 добу.
Порівняльні дослідження ефективності методів екстракції мікобактеріальної ДНК. Для виділення ДНК із культур мікобактерій найменш ефективною (відсутня ампліфікація розведень 1:103 та 1:104) і водночас найбільш тривалою (2,5 год) виявилася фенол-хлороформна екстракція. Порівняно з нею інші методи фізичної екстракції були більш ефективними (отримано ампліфікацію розведення 1:104) і швидкими – від 6 хв (руйнування клітин скляними бусинками) до 25 хв (решта методів). З огляду на такі критерії, як швидкість, трудомісткість, витрати на реактиви та обладнання, найбільш ефективним виявився запропонований нами метод екстракції ДНК шляхом обробки мікобактеріальних клітин нагріванням за температури 100±1 °С (Деклараційний патент України № 8094 від 15.07.2005).
Видова диференціація культур мікобактерій методом ПЛР. За результатами досліджень культур мікобактерій методом ПЛР із праймерами, специфічними до комплексу M. tuberculosis, позитивними виявилось 17 (13,6зі 125 зразків ДНК мікобактерій. Усі ці культури було досліджено також і з праймерами, специфічними до M. bovis і M. tuberculosis, у результаті чого 16,8 %) культур віднесено до виду M. bovis.
ПЛР-дослідження з праймерами, специфічними до комплексу M., дозволили віднести до нього 38 (30,4 %) культур. Як показали подальші дослідження, 19 культур належали до M. avium subsp. avium (1 культура змішана з M.), а інші 19 – належали до M. avium subsp. hominissuis (1 культура також змішана з M.). Решту ізолятів (55 %) було ідентифіковано як Mycobacterium spp. методом ПЛР із родоспецифічними праймерами (рис. 1). Подальшу диференціацію цих ізолятів було здійснено з використанням інших молекулярно-генетичних методів.
Рис. 1 Співвідношення культур мікобактерій, досліджених методом ПЛР (n ).
Рестрикційно-ензимний аналіз ділянки гена groEL2 (hsp65) використовували для видової диференціації мікобактерій, вид яких не було визначено в ПЛР. З 73 культур мікобактерій, досліджених у РЕА-hsp65, 22 (30,1 %) показали профіль рестрикції, характерний для конкретного виду, натомість 45 культур (61,6 мали профіль рестрикції, близький двом видам мікобактерій, а 6 культур (8,2 %) утворили нові профілі, не наведені в існуючих базах даних, що свідчить про відносно низьку специфічність цього методу.
Споліготайпінг. За допомогою цього методу 12 штамів комплексу M. tuberculosis було визначено як M. bovis. Уперше в Україні ми диференціювали 3 штами Mycobacterium, з яких два штами було ізольовано в Херсонській області, один – у Харківській. У всіх досліджуваних штамів відсутні спейсери 3, 9, 16, 39–43. За цими ознаками їх генотипи належать до генетичної родини M.-BCG. Два штами утворили унікальні сполігопрофілі, відсутні в базах даних. Усі інші увійшли до чотирьох генетичних родів із восьми, які підпорядковані в генетичну родину M.-BCG, а саме до BOVIS1_BCG, BOVIS1, CAP, BOVIS2 (табл. 1).
Таблиця 1
Видова диференціація, генетичний рід штамів та регіон їх циркуляції (n = 15)
№ штаму | Восьмеричний код
сполігопрофілю | Висновок про вид мікобактерій | Генетичний рід сполігопрофілю | Область
виділення
901 | 676773777777600 | M. bovіs | BOVIS1_BCG | Харківська
1503 | 676773777777600 | M. bovіs | BOVIS1_BCG | Київська
1502 | 676773777736600 | M. bovіs | BOVIS 1 | Київська
1520 | 676763777736600 | M. bovіs | BOVIS 1 | Київська
1521 | 676773777736600 | M.

Завантажити цю роботу безкоштовно
Пролистати роботу: 1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13 



Реферат на тему: МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧНА ДИФЕРЕНЦІАЦІЯ МІКОБАКТЕРІЙ, ВИДІЛЕНИХ В УКРАЇНІ, ТА ЇХ ФІЛОГЕНЕТИЧНІ ВЗАЄМОЗВ’ЯЗКИ

BR.com.ua © 1999-2017 | Реклама на сайті | Умови використання | Зворотній зв'язок